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如何重新溶解多肽

發布日期:2017-05-06 作者:江蘇吉泰肽業科技有限公司 點擊:

問:多肽的兩端應如何處理?是保持自由狀态還是屏蔽起來? 

答:多肽是用來模拟蛋白的,爲瞭(le)模仿蛋白的表現,我們需要合成與蛋白有相似的結構和電荷的多肽。當一條肽段從一個蛋白中“切出”之後,兩端的電荷數将與基因體蛋白有差異。我們需要改變(biàn)合成策略來使他們一緻。 總體而言: 如果是出自蛋白C端的序列,通過乙酰化将N端屏蔽; 如果是出自蛋白N端的序列,通過酰胺化将C端屏蔽; 如果是出自蛋白中間部分,用乙酰化和酰胺化将兩端都屏蔽。 


問:如果我的肽純(chún)度是95%,那麽(me),其餘的5%都是些什麽(me)物質? 

答:多肽的純度通常是通過HPLC,用每分鍾1%的标準乙晴梯度來檢測(cè)決定的。合成過程中,氨基酸之間的交聯效率不是總能達到100%,因而産生一系列的氨基酸缺失的雜質。大多數這樣的氨基酸缺失的雜質在純化過程中都被去掉瞭(le),但有少數的雜質其色譜表現與目标多肽很相近。這些氨基酸缺失的雜質肽留在瞭(le)多肽樣品中就構成瞭(le)餘下的幾個百分點。


問(wèn):如何重新溶解多肽? 

答:多肽的溶解與多肽的序列相關,首先試蒸餾水和超聲(1-10MG/ML),如果不溶,計算肽中的堿性殘(cán)基(Lys,Arg,His和自由氨基端)和酸性殘(cán)基(Gly,Asp和自由羧基端)的數目。如果堿性基團偏多,可以滴加1N的醋酸,直到溶解爲止,如果酸性基團居多,滴加1N的氨水,直到溶解爲止。如果在實驗中需要用緩沖(chōng)液,建議在多肽完全溶解之前不要加入鹽,因爲鹽會使肽的溶解度降低。如果上述溶液中肽都不溶,可以試試用少量有機溶劑如DMSO,乙晴或DMF。


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