多肽廠家溶解方法介紹
溶解多肽是非常複雜的事情,一般很難一下子確(què)定合适的溶劑。通常是先取一點(diǎn)試驗,在沒有確(què)定合适的溶劑前千萬不要全部溶解。
下列方法有助於(yú)您選擇合适的溶劑(jì):
(1) 判定多肽的電(diàn)荷特定,設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH爲-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2爲+1,其它氨基酸的電(diàn)荷爲0。計(jì)算出将電(diàn)荷數。
(2) 如果淨電(diàn)荷數>0,多肽爲堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然後(hòu)加入500ul水稀釋。
(3) 如果淨電(diàn)荷數<0,多肽爲酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然後(hòu)加入500ul水稀釋。
(4) 如果淨電荷數=0,多肽爲中性,含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘(cán)基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解於(yú)少量有機溶劑中,如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇,然後加水(蒸餾水)稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解,因爲DMSO可能造成側鏈氧化。還有人建議需要尿素來溶解。對於(yú)含有自由半胱氨酸的肽,需使用DMF而不是DMSO。對於(yú)疏水性很大的多肽,可添加6M鹽酸胍或8M尿素,然後進行必要的稀釋。
爲瞭(le)防止或盡量減少多肽降解,請将多肽以凍幹粉形式保存在-20°C或更低溫度更佳。如果需要保存溶液肽,分成小樣存放,以避免反複凍融。一份樣品融凍後未用完,應扔掉。細菌降解有時會成爲溶液肽的麻煩,所以請将肽溶於(yú)無菌水或肽溶液過濾除菌。