多肽合成儀的工作原理是什麽

多肽合成儀是指用來 合成多肽的儀器，因爲多肽合成的步驟很繁瑣，又很耗時，多家公司開發瞭自動多肽合成儀。一般分爲兩類，一類是針對數量少但合成量大的生産型應用，典型代表是美國ABI公司的ABI336型多肽合成儀，其 反應器轉動方式有别於前兩代的多肽合成儀，即反應器上方相對固定，而下方作圓周360度快速旋轉，帶動反應器裏的固液兩相從底部向上作螺旋運動，一直達到反應器的最上方；另外一類多肽合成儀針對於藥物研發、基因研究等科研性應用，典型代表是德國Intavis AG公司的ResPep SL和MultiPep RS系列，可以同時提供固相合成和膜合成的應用，並能自動幫助客戶進行圖譜篩選同時完成高通量的多肽合成工作。

運行原理

多肽合成儀以固相合成爲反應原理，在密閉的 防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序（序列，一般從C端- 羧基端 向 N端-氨基端）不斷添加、反應、合成，操作最終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕瞭(le)每步産品提純的難度。爲瞭(le)防止副反應的發生，參加反應的氨基酸的 側鏈都是保護的。 羧基端是遊離的，並(bìng)且在反應之前必須活化。固相合成方法有兩種，即Fmoc和tBoc。由於Fmoc比tBoc存在很多優勢，現在大多採用Fmoc法合成，但對於某些短肽，tBoc因其産率高的優勢仍然被很多企業所採用。 　　具體合成由下列幾個循環組成： 　　1） 去保護：Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去 除氨基的 保護基團。 　　2） 激活和交聯：下一個氨基酸的羧基被一種 活化劑所活化。活化的單體與遊離的氨基反應交聯，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環：這兩步反應反複循環直到合成完成。 　　3） 洗脫和 脫保護：多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑（TFA） 洗脫和脫保護。

基本元件

反應器 　　 數百年來，制藥業的反應器/ 反應釜 設備(bèi)以玻璃材質最爲常見，因其完全透明且耐腐蝕，而被衆多化學、生物學專家沿用。多肽合成的過程需要操作人員直觀監測，同時合成後可進行在 線切割（切割試劑TFA的強腐蝕性對反應器材質有瞭(le)極大限制），這些要求限制反應器以玻璃材質最爲适用。 　　玻璃材質的反應器在制造工藝上有極大的難度限制：①燒制工藝：磨口精度要求極高，正如很多國産設備(bèi)都無法達到要求出現漏液漏氣現象，玻璃壁均勻程度等。②配合攪拌柄以及密封裝置的成套加工工藝③防爆處理 　　 氨基酸儲罐 　　 溶劑儲罐 　　 量筒 　　轉液瓶 　　 感應器 　　 多端觸發器自感應定量量取法，直觀、科學、 相對誤差最低。 　　 廢液桶 　　廢液桶通常選擇容積較大的HDPE桶，保證通風良好，同時需安裝感應器裝置時刻檢測廢液情況，避免溢出。

控制配件

電磁閥 　　多肽合成儀中的電磁閥屬於(yú)敏感配件，其控制液路的串聯與閉(bì)路，在氨基酸轉移與量取，溶劑轉移與量取兩步驟中起到至關重要的作用。不同品牌的合成儀對電磁閥的設計與排布也略有不同。 　　 控制面闆 　　控制面闆内往往含有光敏組建，部分控制電磁閥以及感應器控制組。與 電腦主機的控制系統、合成儀統一的鏈接在一起，完成多肽合成的全過程。 　　 軟件系統 　　多肽合成儀的操作軟件。不同品牌合成儀所注冊的軟件也不同。

檢測方法

在多肽合成儀中，在線檢測耦合效果的裝置，如UV Monitor往往是選配裝置，客戶可根據實驗的需要選購。其功能是讓操作者直觀的看到多肽合成的每一部氨基酸偶聯效果，從而針對特定的序列做合成設置的調整，最終達到最佳合成效果。 　　對於(yú)不熟悉多肽合成儀操作的用戶來說，UV Monitor是相當重要的。 　　 試劑檢測：沒有選購在線檢測附件的多肽合成儀用戶，也可以採(cǎi)用試劑檢測方法做基本的耦合效果測定實驗。 　　 固相多肽合成中，主要是通過檢測樹脂上遊離氨基來判斷連接效率，檢測方法稱爲Kaiser方法，其檢測結果，如果有遊離氨基的時候，顯示蘭色，或紅褐色（pro，ser，His）。 　　Kaiser試劑包括：A，6% 茚三酮的乙醇溶液；B，80% 苯酚的乙醇溶液；C，2% 0.001M KCN的 吡啶溶液 　　配制中的吡啶需要經過茚三酮處理後，重蒸後再使用。檢測過程，取少量樹脂，加入A，B，C各2-3滴，100℃下加熱1-2min，如果溶液有蘭色，或樹脂出現蘭色，紅褐色，表明還有遊離氨基，否則說明連接完全。