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多肽都有哪些日常保存常識

發布日期:2017-09-30 作者:江蘇吉泰肽業科技有限公司 點擊:

一.多肽的保存  

       多肽在-20℃很穩定,特别是冷凍幹燥並(bìng)保存在幹燥器中,在将它們暴露於(yú)空氣之前, 冷凍幹燥多肽可以放於(yú)室溫。這将是濕度影響減少,當無法冷凍幹燥時,最好的方法是以小的工作樣量存放。  

       對於(yú)含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖(chōng)劑對其溶解必不可少,因爲這種多肽可易空氣氧化, 在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氩氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比,生命期有限。 多肽的溶解性 

       大多數肽的首選溶劑是超純(chún)抽氣水。稀乙酸或氨水分别對於(yú)堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽, 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來溶解,這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設計多肽時要加注意。 

       殘(cán)基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解難(nán)度。  

       您需要特殊的多肽或任何技術幫(bāng)助,請随時與我們聯系。 我們包你完全滿意,對於(yú)我們不能适當合成的順序,我們不收費。多肽的保存和操作 

       包裝 1mg或更少的多肽按淨(jìng)重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%, 在1mg樣品中,那麽瓶中毛重是1.25mg。 

       大量的多肽以毛重算。标出的重量含相關(guān)抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比爲90%,那麽,實際(jì)肽量爲25mg×90%=22.5mg 

    不要把肽含量和純(chún)度搞混瞭(le)。肽的純(chún)度可能是100%, 而肽含量相關帶電基團(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。凍幹肽的保存 

       所有産品應存於(yú)冰箱, 最好爲-20℃。多數肽以此方法可以存放幾年不變(biàn)。肽溶液的保存 

       溶液肽遠比凍(dòng)幹形式不穩定,溶液應爲中性pH(pH5-7), -20℃保存的,爲避免樣品的反複凍(dòng)融, 最好分成小樣存放。一份樣品融凍(dòng)後未用完, 應扔掉,細菌降解有時會成爲溶液肽的麻煩, 爲克服此,肽應溶於(yú)無菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過濾。 多肽的重建和操作 

       多數肽溶於(yú)無菌蒸溜水。初次溶解時,要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許加入其它溶解劑或緩沖(chōng)鹽。 

       如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫(bāng)助溶解:   對(duì)堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)   酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu) 

       對(duì)極疏水的肽用10%有機修飾物(Acetonitnile , Methanol)   極不溶的肽用DM50或DMF guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用, 與上述方法合用, 聲處(chù)理也是溶解多肽的有效手段。 多肽應用和保存 

       多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結構。除瞭(le)最太肽外,這點都會發生, 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進二級結構形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用聲處理。溶解仍有問題, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,會便於(yú)溶解。 

       要長期保存多肽, 最好冷凍幹燥,冷幹粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠不穩定。 多肽易受細菌降解,應用無菌純化水溶解。   含有Met, Cgs或Try殘(cán)基的多肽溶液由於(yú)氧化,壽命有限。應溶於(yú)無氧溶劑, 爲防止重複凍融的破壞, 建議溶解過量的肽的便實驗,其餘多肽以固體形成保存。 HPLC分析和純化 分析HPLC使用柱子和泵系統,可以經受傳遞高壓,這樣可以用極細的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在幾分鍾内高度被分析。 

       HPLC分兩類:離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH範圍帶(dài)有特定電荷衍變(biàn)成一種離子體,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸組成表現出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用,通過可變(biàn)PH, 離子強度, 或兩者洗脫出多肽,通常, 先用低離子強度的溶液,以後逐漸加強或一步一步加強,直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶(dài)正電來分離。 

       反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強度洗脫, 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到矽上的碳氫烷鏈構成,這種鏈長度爲G4-G8碳原子。 由於(yú)洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的, 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而,總體實踐中, 這兩類柱互變(biàn)無多少顯著差别,别類載體由碳水化合物構成, 比如苯基。 

       典型的操作常由兩绶沖(chōng)劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變(biàn)以每分鍾0.5%到1.0%改變(biàn)的速度混合。常見分析和純化用柱爲4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那麽大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m) 

       大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨,TFA/TEA,磷酸鈉或鉀,異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點:矽反相柱料不能長(zhǎng)時間暴露於(yú)高pH,甚至微堿pH, 因爲這樣會破壞柱子。


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