1、多肽與載體蛋白交聯
對在動物體内産生免疫反應而言,大多數多肽的分子量都太小。将多肽與載體蛋白如KLH等交聯之後,不僅能增加抗原的大小,也能增強免疫性。我們可以提供與KLH和BSA兩種蛋白的交聯。大多數客戶選擇與KLH交聯,因爲KLH的免疫性更好,而且BSA在很多實驗中作爲Blocking試劑,由於動物體内既會産生對多肽的抗體也會産生對載體蛋白的抗體,這樣會出現假陽性。
2、抗體的使用
由於抗體與很多生物分子,以蛋白和多肽等尤爲顯著,有很強的結合能力,抗體在生物醫學研究中占據獨特的重要地位,在對蛋白的特性、含量的測定、分布情況的分析和蛋白的確證等方面都需要用到抗體。例如:診斷試劑盒如早孕試劑盒等,蛋白microalloy、immunohistochemistry 和普通的ELISA實驗等。由於抗體有對特定分子很強的結合能力的特點,用抗體進行體内治療成瞭許多努力的方向。成功的範例包括Genetech的Herceptin,用於治療一類特殊的乳腺癌和IDEC藥業公司的Ritaxan,用於特定類型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-細胞。
3、抗原和識别區域:
大多數情況下,antigen和immunogen兩個字是可以互換使用的,它們的差别是很小的。他們是分别指一個分子與免疫系統之間的兩種類型的相互作用。一個immunogen是指能使一個生物組織的免疫系統産生免疫反應的分子,而一個antigen是指能與這種免疫反應的産物結合的分子,所以immunogen一定是antigen,但antigen不一定是immunogen,我們這裏通用antigen,特指能與免疫反應的産物—抗體結合的分子。
識别區域(epitopes)是指一個抗原分子中一個與抗體直接結合的一段特定的序列,對於任何抗原(抗原蛋白),很有可能有多個抗體識别區域,對生産抗體而言,易於抗體識别的部位的識别區域最爲理想。
4、進行KLH交聯的化學方法
我們用MBS活化KLH,這樣能将載體蛋白(KLH)上面的自由-SH與多肽末端的Cys的側鏈-SH連接起來,這種方法直接,特異性高,而且穩定,通常選擇對免疫不重要的一端進行交聯。
EDC活化載體上的-COOH,将載體的-COOH和多肽的-NH2連接起來也是一種可行的方法。但我們隻建議在多肽序列中有多個Cys時採用該方法。如果肽鏈中含有多個-COOH或-NH2基因,不建議使用該方法,因爲會造成多重點交聯的情況,使多肽結構受影響。常用載體蛋白除KLH外,還有BSA,Ovalbumin等,造成KLH的優勢是它不幹擾ELISA或Western Blot等實驗。
5、對抗原多肽交聯合适的肽鏈長度
通常建議10-15個殘基進行交聯。肽鏈越長,抗體識别的區域越多,但也就越多機會形成穩定的二級結構。就不再是天然的形式瞭。太短的肽通常是沒有用的,除非有充足的理由,如與相關家族蛋白或其他蛋白有序列同源性等。
6、KLH交聯多肽溶液呈乳狀的原因
KLH是一個很大的並且聚合的蛋白。因爲它的結構和大小,它在水中的溶解度是很有限的,因此是乳狀,這並不影響它的免疫性,這種混濁的溶液可以直接免疫動物。
7、抗體的産量
抗體的産量取決於很多因素:識别區域的選擇,多肽的合成,載體的交聯,免疫的操作步驟和動物的生理系統等等,因此抗體的産量是不等的。5-25mg都屬於正常範圍。