1.氨基化及乙酰化
如果合成多肽爲蛋白質的内部序列,通過N端乙酰化或C端氨基化可以去除多肽電荷使其更趨向於蛋白質的自然結構,同時增強瞭多肽對外肽酶的抵抗力。
2. 生物素及FITC标記(jì)
FITC是熒光标記的活性前體。爲瞭(le)有效的标記N端,可在多肽的N端和熒光基團之間插入七原子胺己苯酸酯間隔結構(NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH);在C端進行生物素标記時,常在其末端加上一個賴氨酸殘(cán)基,生物素被連接到賴氨酸側鏈,同時賴氨酸的的正電荷也被去除。
3. 多種二硫鍵(jiàn)修飾(shì)
在半胱氨酸殘(cán)基間制作二硫鍵可以實現多肽環狀化。對於(yú)含兩個以上半胱氨酸殘(cán)基的多肽來說,二硫鍵是随機形成的,可在半胱氨酸指定的位置構建二硫鍵,最多能實現一條多肽内指定位置構建三個二硫鍵修飾。
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4. 多種(zhǒng)磷酸化
多肽磷酸化可以幫(bāng)助研究磷酸化對多肽和蛋白結構的影響以及蛋白激酶的作用機理,已經成功地爲客戶合成瞭(le)大量的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等磷酸化多肽,含兩個磷酸化氨基酸的多肽序列合成成功率超95%。
5. KLH, BSA,OVA
多肽抗原由於(yú)太小而不能産生顯著的免疫反應,因此需要将多肽抗原偶聯到BSA、OVA、KLH等較大的蛋白載體上。KLH由於(yú)在ELISA或Western blotting檢測中沒有抑制作用從而不影響檢測結果。常用的偶聯原理是順丁烯二酰亞胺理論,即将多肽中的半胱氨酸殘(cán)基與載體蛋白偶聯。因此合成抗原多肽時,在其N端或C端添加一個半胱氨酸殘(cán)基有利於(yú)多肽與載體蛋白的偶聯。
注:KLH是一種很大的凝聚蛋白(MW = 4*105 to 1*107),由於(yú)它特殊的大小及結構,它在水中的溶解度不高,常常需要採取一些方法解決,但這並(bìng)不影響免疫原性,免疫時常使用混合溶解的方法。
6. 聚乙二醇修飾(shì)
聚乙二醇修飾是将非離子的、無毒的、生物體不排斥的及高親水性的聚乙二醇聚合體,通過化學方法偶聯到大分子上(蛋白質、多肽等等)。聚乙二醇修飾的大分子由於(yú)溶解性(主要指疏水性藥物)及生物利用率的增高,寄主内最小免疫反應的抗原僞裝,腎清除率降低循環時間延長,從而提高瞭(le)治療能力。
7. 同位素标記(jì)
爲瞭(le)進行核磁共振實驗,我們将多肽标記穩定的非放射性的同位素。标記2H、15N、13C、或 15N 及 13C同時标記的多肽合成後便於(yú)檢測。如果您需要标記修飾,請提供您的序列及标記需求。
8. 複(fù)合抗原肽修飾(shì)
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生産高效價的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以賴氨酸的a-或e-基團形成主鏈,以多拷貝(bèi)的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據賴氨酸的數目,可以合成不同數目側鏈的多抗原肽,這樣不必将抗原偶聯到載體蛋白質便能産生高滴度、高親和力的抗體。溶解性(主要指疏水性藥物)及生物利用率的增高,寄主内最小免疫反應的抗原僞裝,腎清除率降低循環時間延長,從而提高瞭(le)治療能力。
以上就是多肽合成小編(biān)給大家介紹的相關内容,希望對大家有所幫(bāng)助。