多肽廠家給您介紹原料藥制備工藝研究

合成多肽藥物的藥學研究内容和一般化學藥物一樣，主要包括原料藥的制備工藝研究和結構確證研究、制劑的處方工藝研究、質量研究和質量标準的制訂、穩定性研究等。這些研究内容的一般性的技術要求也和一般化學藥物基本一緻。但是，正如前面所讨論的，多肽藥物還有一些特殊的方面需要在研究中予以考慮，以下主要是針對多肽藥物藥學研究的特殊内容及其技術要求進行讨論，這些技術要求也包括瞭對申報資料内容的一些要求。

（一）原料藥制備工藝研究

1、工藝選擇

研究者可以根據目标肽的結構、自身生産條件等考慮選用液相合成或固相合成工藝。但無論採用何種合成工藝，均需要提供化學反應式、工藝流程圖、操作過程等，對工藝參數（如投料量、反應條件、反應試劑）要有詳細的描述，包括對於多肽的修飾（例如二硫鍵的形成等）。

2、起始原料、試(shì)劑(jì)的質量控制

（1） 氨基酸及其衍生物

氨基酸及其衍生物作爲多肽合成的起始原料，其質量對合成多肽的質量有重要影響，因此應關注氨基酸及其衍生物的來源、質控方法等。對於起始原料的質量控制應足以保證其質量的一緻性，以最終保證合成的多肽批間質量的穩定。作爲起始原料的氨基酸及其衍生物的質量标準一般應包括性狀、熔點、比旋度、化學純度、色譜純度及光學純度、含量等，其中對於起始原料的化學純度和光學純度的控制尤爲重要。

如果使用瞭特殊的氨基酸或其衍生物，例如經過複雜修飾的非天然氨基酸、採用新工藝合成的氨基酸等，申報資料中還應提供其合成工藝及結構研究的相關資料。

（2） 樹脂

採用固相合成方法制備多肽，應提供樹脂的來源、質量标準和檢驗報告，並對樹脂的摩爾取代系數、在不同溶劑中的膨脹系數、所用合成條件下的穩定性情況、交聯度等予以說明。

常用樹脂包括聚苯乙烯-苯二乙烯交聯樹脂、聚丙烯酰胺和聚乙烯-乙二醇類樹脂及衍生物等，應根據目标多肽C末端氨基酸的不同類型（如羧酸型、酰胺型等）選擇特定用途的樹脂，並說明選擇的依據。

（3）試劑和溶劑

可以參考《化學藥物原料藥制備和結構確證研究技術指導原則》的基本要求。

3、工藝的過程控制

（1）反應終點監控

液相合成屬於常規有機合成，一般可採用色譜法(如TLC法、HPLC法)監測；固相合成偶合反應的終點可採用茚三酮法、三硝基苯磺酸（TNBS）法和四氯苯醌等監測。二硫鍵連接的終點可用Ellman試驗或HPLC法監測。除上述方法外，其他合适的方法也可以使用。

（2）中間體質量控制

對於液相合成，應參照《化學藥物原料藥制備和結構確證研究的技術指導原則》對中間體的質量進行控制，特别要對縮合片段制訂合适的質量标準（例如對比旋度、熔點和純度等進行控制），含有較長序列的中間體還應進行結構研究（例如氨基酸組成分析、氨基酸序列分析、質譜、比旋度等）。

對於固相合成，一般無中間體分離過程。但如果多肽從樹脂上切割後還需進行後續反應，對中間體的質量也要進行相應控制，同時還要進行相應的結構研究。

4、分離和純化

在多肽合成過程中，會産生一些與目标多肽結構和性質類似的雜肽，例如缺失肽、非對映異構體等，随著肽鏈的增長，可能存在的雜肽數量也随之增加。因此，應研究合适的純化方法将目标肽從雜肽中分離出來。

多肽純化方法的選擇需要綜合考慮多肽和雜肽的肽鏈長短、極性和荷電性、粗品的純度等。可用於多肽純化的方法包括重結晶、逆流分布、電泳、離子交換色譜、凝膠過濾色譜、反相色譜等。目前已上市多肽藥物常見的純化方法是採用凝膠柱脫鹽後，再用制備型高效液相色譜進行純化。

對於選定的純化方法，應提供詳細的驗證性資料例如純化前後樣品的代表性色譜圖以說明純化效果。同時應提供詳細的純化過程和相關的工藝參數。純化工藝的研究可結合質量研究中雜質分析方法的驗證進行。

純化後樣品的幹燥方法也應明確。常用的幹燥方法爲凍幹法，如果多肽對溫度不敏感，也可採用室溫或高溫幹燥。