多肽的溶解和保存

建議先用少量肽來試驗最适溶解方法，隻有當多肽完全溶解後，才能加入溶液並(bìng)将之稀釋至最終濃度。即先溶解，後加入緩沖液。注意: 總是将多肽加入到适當溶劑中攪拌，而不能採(cǎi)用其它方式。 

凍幹多肽的溶解

1. 多肽溶解中的主要問題是二級(jí)結構(gòu)的形成。 

雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯，但除瞭(le)最短的肽鏈外，該現象發(fā)生在幾乎所有肽鏈，與極性無關。因此，溶解多肽的第一個原則是用無菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無氧水)。 

多肽溶液可能遇到細菌降解。爲避免該(gāi)現象的發(fā)生, 多肽應溶解在無菌的蒸餾水中, 或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過濾除菌。 

包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化, 因此應該(gāi)溶於(yú)無氧的水中。無氧水可以通過注入惰性氣體(氮、氦、氩)減壓除氣得到。 

2. 若多肽不溶於(yú)純水，超聲處理有助於(yú)打碎顆粒並(bìng)增加溶解度。注意: 超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。 

3. 若多肽中包含多個堿性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液；對(duì)於(yú)疏水性非常強的多肽，則使用50%乙酸。 

4. 若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖(chōng)液溶解。pH值在層(céng)析前必須調整。 

5. 異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱，有機(jī)溶劑(jì)的量則必須很少，否則将嚴重影響停留時間。 

6. 若多肽因爲含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈而高度疏水，或爲中性肽時, DMF或DMSO等膜變(biàn)性劑的使用，有助於(yú)多肽的溶解。 

a. 高濃度膜變(biàn)性劑通過破壞多肽的二級結構(gòu)而助溶。 

b. 膜變性劑适於(yú)多肽分析液的制備(bèi), 但可能會對其生物活性的研究工作造成幹擾。 

c. DMF是最佳變(biàn)性劑(最高濃度可達(dá)30%), 滴加至多肽溶解。 

d. 反相層(céng)析時, DMF将與洗脫液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF 流出後(hòu)幾分鍾内流出, 若肽鏈很小, 洗脫太早, 多肽的量将降低。